Anwendbarkeit der Displacement-Chromatographie bei der Trennung von β-Lactoglobulin und α-Lactalbumin aus der Molke - Alexandra Pahl (Hochschule für angewandte Wissenschaften Hamburg, 2020)
Es wurden die reinen Proteine β-Lactoglobulin und α-Lactalbumin mittels des Anionenaustauschermaterials Fractogel® EMD TMAE Hicap (M) untersucht. Dieses Material wurde in eine selbstgebaute Minisäule, welche ein Säulenvolumen von 0,12 ml besitzt, gefüllt. Die Minisäule wurde als Anionenaustauscher für alle Versuche verwendet. Die Untersuchung wurde mit der Methodik der Frontalchromatographie durchgeführt, wobei ein Probenvolumen zwischen 30 und 40 ml kontinuierlich über die Säule gegeben wurde. Anschließend erfolgten weitere Untersuchungen mit einem Proteingemisch der zwei reinen Proteine. Diese Vorversuche dienten dem Hauptversuch, in dem β-Lactoglobulin und α-Lactalbumin durch eine Displacement-Chromatographie, bei der die Proteine durch einen Verdränger auf der Säule voreinander geschoben und eluiert werden sollen, aus der Molke getrennt wurden. Dazu wurde die aufbereitete Molke zunächst über einen Kationenaustauscher (HiTrapTM SP XL) geleitet, um positiv geladene Molkeproteine abzutrennen. In der Displacement-Chromatographie wurden die gebundenen Proteine über einen Stufengradienten, welcher 1 M NaCl oder 1 M Citrat enthielt, eluiert. Dabei konnte durch die SEC Untersuchung ein Verdrängungseffekt von α-Lactalbumin durch β-Lactoglobulin im Phosphatpuffer nachgewiesen werden.