Vergleich der Transfektionseffizienz und Anzahl von generierten stabilen Klonen durch Elektroporation zirkulärer und linearer DNA in eukaryotischen Zellen - Hagen Hentschel (2014)
Ziel dieser Arbeit ist es, eine Aussage über die Transfektionseffizienz und die Anzahl von generierten stabilen Klonen durch Elektroporation mit zirkulärer und linearer DNA in CHO-Zellen zu treffen. Die Vermutung ist, dass die Effizienz bei der transienten Transfektion mit zirkulären Vektoren höher ist als bei der Transfektion mit linearen Vektoren. Dabei sollen CHO-K1-Zellen mit einem für GFP codierenden Gen transfiziert werden. Dazu werden zwei verschiedengroße Vektoren ausgewählt, ein kleiner Vektor mit 4731 bp (pEGFP-C1) und ein großer Vektor mit 8180 bp (pCMV-GFPlong). Als Transfektionsmethode wird die Elektroporation mit dem MaxCyte®-STX™-System gewählt. Aus den transfizierten Zellen sollen zusätzlich stabil-transfizierte Klone isoliert werden. Hier ist die Vermutung, dass die stabile Transfektion eine höhere Effizienz bei der Verwendung von linearen Vektoren hat als bei der Verwendung zirkulärer Vektoren [Oliveira et al., 2005]. Zur Verifizierung der Expression von GFP soll mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie das rekombinante GFP nachgewiesen werden. Die Zellkernfärbung mit DAPI soll als Gegenfärbung eingesetzt werden. Es soll ermittelt werden, welchen Einfluss die Konformation und die Größe des zu transfizierenden Vektors auf die Effizienz der Transfektion hat. Eine weitere Aussage ist zu treffen, welchen Einfluss die verschiedenen Vektoren und deren Konformation auf die Viabilität der transient-transfizierten Zellen hat.