Etablierung serumfreier Assay Ready KeratinoSens Zellen für den Einsatz im ARE-Nrf2-Assay gemäß OECD TG 442D

Abstract

In dieser Arbeit wurde untersucht, ob serumfrei kultivierte und kryokonservierte KeratinoSens SF Zellen für den Einsatz im Assay Ready Format im KeratinoSens™ Assay gemäß OECD TG 442D geeignet sind. Der Schwerpunkt der Arbeit lag dabei auf der Optimierung der Kryokonservierung sowie der funktionellen Bewertung der Zellen im Assay Ready Format. Hierzu wurden unterschiedliche serumfreie Einfriermedien untersucht und mit einem serumhaltigen Kontrollmedium verglichen. Die kryokonservierten Zellen wurde direkt nach dem Auftauen im KeratinoSens™ Assay getestet, um den Einfluss der Referenzsubstanzen gemäß OECD TG 442D zu bewerten. Nicht sensibilisierende Substanzen konnten als negativ eingestuft werden. Bei den sensibilisierenden Referenzsubstanzen zeigte sich trotz teilweise erhöhter Zytotoxizität überwiegend eine Guideline konforme Induktion, sodass vier von sechs Referenzsubstanzen als positiv eingestuft wurden. Dadurch konnten die KeratinoSens SF Zellen im Assay Ready Format die Anforderungen der technischen Überprüfung nicht vollständig erfüllen. Ergänzend wurde die Kultivierung der KeratinoSens SF Zellen bei vier unterschiedlichen Konzentrationen des Serumersatzproduktes im Bereich von 0,5-2 mL/L untersucht, um optimale Bedingungen hinsichtlich der Wachstumsraten und Zellviabilitäten zu bestimmen. Dabei wurde eine Arbeitskonzentration von 1 mL/L SimPlaceX festgelegt. Die Ergebnisse der Langzeitkultivierung zeigten, dass die Zellen unter serumfreien Bedingungen über längere Zeiträume kultiviert werden konnten ohne deutliche Einbrüche der Wachstumsarten und Zellviabilität zu beobachten. Zusammenfassend zeigen die Ergebnisse, dass die serumfrei kultivierten und kryokonservierten Zellen im Assay Ready Format eine grundsätzliche Funktionalität aufweisen. Gleichzeitig zeigen sie jedoch eine erhöhte zelluläre Belastung, sodass weiterer Optimierungsbedarf besteht, um die Anforderungen der technischen Überprüfung gemäß OECD TG 442D vollständig zu erfüllen.