Etablierung von Immobilisierungsmethoden zur SPRgestütztenInteraktionsanalyse der bakteriellen Resistenzproteine AcrA und TolC

Abstract

Im Rahmen einer Doktorarbeit am Fraunhofer-Institut für Molekularbiologie und Angewandte Oekologie IME ScreeningPort, soll die Interaktion der bakteriellen Transportproteine AcrA und TolC untersucht werden. Zusammen mit AcrB bilden diese Proteine einen transmembranen, energieabhängigen Transporter für niedermolekulare Verbindungen bei grammnegativen Bakterien. Dadurch sind die Bakterien in der Lage die intrazelluläre Konzentration verschiedener Antibiotika zu verringern, was einen effizienten Resistenzmechanismus darstellt. Am Fraunhofer-Instituts für Molekularbiologie und Angewandte Oekologie IME ScreeningPort wurde ein Messgerät angeschafft, dass auf Basis der Plasmonenresonanzspektroskopie funktioniert. Mit seiner Hilfe soll im Rahmen dieser Doktorarbeit die Interaktion von AcrA und TolC mit möglichen Wirkstoffen, die die Interaktion beeinträchtigen, untersucht werden. Damit die Arbeit an diesem Messgerät, MASS1, Reibungslos verlaufen kann, wurden im Rahmen diese Bachelorarbeit die zwei Immobilisierungsmethoden, Thiol- und Aminokopplung, mit BSA, HSA, CAII und AcrA erfolgreich getestet. Des Weiteren wurde die Interaktion von großen Molekülen unter einander und von großen Molekülen mit kleinen untersucht. Die gewonnen Daten wurden mit Literaturwerten verglichen. Im Fokus standen dabei die erzeugte Datenqualität und die kinetische Kurvenanpassung. Hierbei werden zwei Analyseprogramme, Prism von GraphPad und AnalyserR2 vom Gerätehersteller SierraSensors GmbH, mit einander verglichen.